轉染腺病毒：大概用50-100 μl/瓶(75 cm2)，加入病毒前換培養液，之后不用換液，直到3 d左右收集病毒，效果比較好。
培養293細胞應注意以下幾個方面：
1.用1640加10%胎牛血清，有的種系用DMEM.血清要求質量較高，在普通血清中細胞生長不太好。1640用雙蒸水溶解，按說明加入碳酸氫鈉。
2.培養液中應加入HEPES，起緩沖pH值的作用，否則會影響細胞狀態。如果用20%的HEPES，每次配培養液時每200ml培養液可加入5ml.加入HEPES后1640培養液顏色略呈橘黃色而非暗紅色。
3.消化所用胰酶可選擇0.125%濃度，且不要消化時間太長。也有研究者認為不用胰酶，直接吹打使細胞脫壁，但使用胰酶效果較好。消化時在鏡下觀察到細胞形態稍有變化即可，不要等形態明顯變化后再停止?？梢圆挥眉友褰K止消化，只要將胰酶倒出來，加上培養液吹打即可。
4.傳代密度不宜過高也不易過低，一般1瓶傳3瓶可能比較合適。
5.培養液應該適當偏酸性，在7.0-7.2之間比較好。一般加上HEPES后，pH值是不用調的。
6.細胞代數越高生長越快，同時性狀和原代差別也更大。一般2-3天傳代一次比較合適。
7.傳代時細胞密度在80%左右比較好，如果超過90%融合再傳會影響細胞狀態。
293細胞培養
293細胞是用5型腺病毒75株系轉化，含有Ad5 E1區的人胚腎亞三倍體細胞系，是一種E1區缺陷互補細胞系。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham與J.S.Miley于1976年用DNA轉染技術構建而成。293細胞是貼壁依賴型呈上皮樣細胞，表現出典型的腺病毒轉化細胞的表型，細胞允許Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。哺乳細胞的大規模培養方式有三種：貼壁培養、微載體培養、無血清懸浮培養。這三種方式均可用于293細胞的大規模培養。293細胞在無Ca2+或含Ca2+培養基中可同樣生長，也可生長在血清濃度降低的培養基中。單層培養細胞在5-10％FBS-DMEM中能生長很好。一般來講，1:10傳代后，一周可以長滿。嚴禁過度生長，這點很重要。因為會導致細胞密度加大和堆積，影響病毒斑的形成和轉染，傳代時也不易打散。懸浮的293細胞很容易大規模培養，但不容易長期保持穩定。293細胞在傳代120次以后，其表型可能改變，生長狀況不再完全是單層的了，偶爾會形成局部的細胞成團聚集，應立即拋棄，重新引入新傳代的細胞。
293細胞培養特性：
1、293細胞明顯適應酸性環境,pH值在6.9～7.1時,可順利貼壁生長, 換液時動作要輕。一般用高糖的DMEM培養基。
2、傳代：倒去廢液，PBS洗一次（輕），用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長良好細胞，培養瓶中輕搖,使之流遍所有細胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細胞變圓,就可加DMEM終止消化，反復吹打**細胞全成單個懸浮細胞即可。12小時-24小時90%以上細胞貼壁。293細胞傳代時機為達80-90%匯合，傳代比例為1：3。
3、293細胞在低代時容易貼壁，生長良好，在傳到幾十代以后，易聚集成團，且貼壁不牢，用PBS沖洗時即可能脫落，即使消化后也不容易吹打成單細胞懸液，**好購入時先大量凍存。
4、復蘇　293細胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。細胞冷凍后復蘇時,都有不同程度的腫脹,若以50ml培養瓶待細胞長滿瓶底的70%～80%時消化凍存,復蘇時將其全部接種**2個50ml瓶中時較為合適。剛復蘇的293貼壁很慢，復蘇接種后24小時內,應盡量減少觀察細胞次數或不作觀察,以免因晃動而影響細胞貼壁。復蘇后48小時左右觀察貼壁情況并進行**更換培養基比較合適,如果用一次性塑料培養瓶可增加細胞貼壁牢度。換液前宜將培養基預熱。
5、轉染：體外應用293細胞進行細胞轉染時，如果是采用磷酸鈣轉染，一定要注意293細胞不要全部長滿細胞培養盤，長滿細胞時加入磷酸鈣就會使293細胞大片的脫落，**好是當293生長到1/2或2/3時進行磷酸鈣轉染，可以避免細胞的大量脫落。
 
其它的經驗：1、用大瓶培養較小瓶要好，可能是更有利于293均勻的分布，利于營養的攝取
2、培養液要新鮮，每次只配1000ml，分為2-4瓶，不用的培養液，凍存在-20度，
3、要及時傳代，**好是細胞基本鋪滿培養瓶底部，但是細胞之間還沒有完全貼緊，總是多少有空隙的時候**好。
4、如果細胞貼壁不好，可能是消化過久，或是培養瓶不夠干凈，當然要除外細胞污染。
5、如果使用用玻璃培養瓶或皿，可以采用高壓滅菌的0.2%明膠溶液預處理培養瓶/培養皿，方法是將明膠加入培養皿，使之浸泡到底面的各個部分，然后吸出，置超凈臺內晾干即可使用。這樣處理后細胞貼壁效果好且鏡下細胞立體感強。如果是新的塑料培養瓶就不用處理。
 
培養基；GIBCO DMEM粉劑，加雙抗，HEPES，NaHCO3 配置高糖的DMEM培養基1000ml，
1.一袋DMEM培養基（GIBCOBRL)用去離子水溶解
2.加入NaHCO3 2.0g
3.加入谷氨酰胺 0.146g（終濃度為5mM）
4.加入青霉素10萬U（終濃度100u/ml），鏈霉素6.5萬U（終濃度100u/ml）
5.定容900ml
6.過濾除菌、分裝到兩個消毒的500ml瓶子中
7.加入滅活小牛血清100ml。
 
實驗器材：293細胞 Ad-TSHR-289  Ad-β-gal培養瓶 DMEM培養基 胎牛血清 胰酶 HEPES緩沖液 PBS 青鏈雙抗